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    来源：ZSCI基础研究中如果加入动物实验部分则使得研究更加趋于完善，投稿时中稿率也相应会增加。但将动物实验做好却不是一件容易的事情。这篇文章主要讲动物模型的构建技术，把骨科、糖尿病相关的动物模型构建做了一个***的技术汇总，建议先码后读，文章内容有部分做了简化，想看详细讲解可以在文末获取课件！一、骨科相关动物模型1.骨关节炎1）骨关节炎模型构建方法（诱发性）-关节腔内手术法、关节腔注射法。2）模型评分标准①SafraninO染色与OARSI评分（PMID：31046827、30942801）②HE染色与OARSI评分（PMID：30609097）③SafraninO染色与Mankin评分（PMID：30609097）2.骨质疏松症1）骨关节炎模型构建方法去趋法模型PMID：31037128实验动物：小鼠方法：在戊巴比妥麻醉下进行双侧卵巢切除术以诱导骨质疏松症，同时对照组小鼠*进行卵巢外置但未切除。2）模型检测指标(PMID：31037128)①HE染色②Micro-CT③TRAcP染色④Micro-CT相关指标检测3.类风湿性关节炎类风湿性关节炎（RA）是一种慢性自身免疫性疾病状态，其特征是滑膜增生，软骨退化和脊椎关节的骨侵蚀4.强直性脊柱炎1）强直性脊柱炎模型构建方法2）模型检测指标。便于研究者按实验目的需要随时采取各种样品。嘉定区疾病动物模型建模购买

    具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对发明作进一步阐述。本发明构建了pirb基因敲入的小鼠动物模型，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内。具体来说，构建一个cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒，将其克隆进入rosa26基因的内含子1中。rosa26基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的七号染色体。本发明pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，具体按照以下步骤具体实施:步骤1、根据小鼠rosa26基因(genebank：))序列，利用cas-desigher软件在1号内含子设计grna靶序列，并搜索小鼠dbm-db基因组数据库基因，采用crispr脱靶效应软件cas-offinder检测潜在的脱靶位点：**终选取两个grna，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如：seqid**:ggcaggcttaaaggctaacctgg将grna1和grna2分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构；步骤2、利用c57bl/6小鼠文库bac克隆，通过pcr扩增获得pirb基因cds的同源臂，采用in-fusion方法构建含有cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒的质粒打靶载体，通过酶切、pcr及测序对打靶质粒载体进行验证，图1为构建好的pirb基因打靶载体的示意图。长宁区疾病动物模型建模价格小鼠疾病模型研究也是人相关疾病药物研发的起点。

    技术领域：本发明属于遗传学和生物技术领域，具体涉及pirb基因敲入的小鼠动物模型，还涉及上述小鼠动物模型的构建方法。背景技术：鼠源成对免疫球蛋白样受体b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb，pirb)，是人类免疫球蛋白样受体b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2，lilrb2)的同源基因，pirb基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的7号染色体近端，总大小为，编码841个氨基酸，目前鉴定出15个外显子，外显子1起始密码为atg，外显子15的终止密码子是tga(转录本：)。pirb蛋白属于i型跨膜糖蛋白，包含由六个免疫球蛋白样结构域(domain，d)组成(d1-d6)的胞外段，一个疏水的跨膜段，三个免疫受体酪氨酸依赖的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一个itims样序列组成的胞内段。理论上讲，pirb的分子量约为92kd，但是western-blot分析中，pirb经常位于105kd处，因为pirb是糖蛋白。以往研究发现，pirb在免疫系统和中枢调节中均发挥重要作用。在免疫系统中，pirb在许多造血细胞都有表达，包括b细胞、肥大细胞、巨噬细胞、粒细胞和树突细胞，但是在胸腺细胞、成熟的t细胞和自然杀伤细胞不表达。

    即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于，步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是：本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法，本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。通过pirb敲入动物模型与不同类型cre小鼠的杂交，可以用于研究ad不同***或不同细胞类型pirb的调节作用。附图说明图1为本发明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位点的打靶质粒载体的构建图；图2为本发明pirb基因敲入的小鼠模型的构建方法的流程图；图3为本发明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr结果鉴定电泳图；图4为本发明f1代pirb敲入的小鼠验证pirb基因敲入效果的测序峰图；图5为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的方法示意图；图6为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的结果图。大鼠疾病建模请找上海东寰。

    配制成6mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg分别在***天及第八天腹腔注射。实验建立大鼠卵巢早衰模型1.实验仪器及材料：如表1所示。表12.实验方法：①动物信息：sd大鼠，雌性，6-8周，体重180-220g。普通环境饲养，灭菌饲料饲养，自由饮水。②分组及给药剂量：如表2所示。表2③给药途径及频率：腹腔注射；2mg、3mg组连续注射7天；4mg、6mg组***天、第八天注射；对照组连续7天注射生理盐水。④病理检测：末次注射后15天，动物麻醉，采集血液，分离血清，elisa法测定血清中e2、fsh、lh水平变化情况。解剖动物，取卵巢组织称重，对大鼠的卵巢组织形态学进行观察。注射期间每天称重，给药后每周称重两次，每天进行阴道涂片检测动情周期。3.统计方法：采用graphpad进行统计分析。所有计量资料均采用均值±标准差表示采用单因素方差分析各组间均值的差异，p＜。4.试验结果：(3mg组注射完成后*存活一只，不进行统计)如表3、表4、图1、图2、图3所示：①***水平：与空白组相比，2mg组、4mg组、6mg组e2水平均降低，但是只有2mg组有明显降低(p＜)，如图1所示；与空白组相比，2mg组、4mg组、6mg组fsh水平均上升，只有2mg组有明显升高(p＜)，如图2所示；与空白组相比。构建人源移植瘤模型需要合适的免疫缺陷小鼠想知道如何选择？普陀区阿尔兹海默症疾病动物模型建模

人类疾病的动物模型是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。嘉定区疾病动物模型建模购买

    另外pirb在髓细胞和b细胞的表达随细胞分化和***增加。在免疫系统，pirb作为主要组织相容性复合物1(classimajorhistocompatibilitycomplex，mhc1)的受体，***参与免疫调节，包括中性粒细胞和巨噬细胞整合素通路、细胞毒性t淋巴细胞***、b淋巴细胞***和体液—细胞免疫应答等。pirb的前两个细胞外免疫球蛋白结构域(d1-d2)介导mhci和pirb的结合。在***系统(centralnervoussystem，cns)，pirb在许多脑区包括皮层、海马、小脑和嗅球都有表达，但在成年脊髓不表达。在细胞层面，pirb不仅表达于神经元，也表达于星形胶质细胞。在许多病理条件下，如脑外伤、中风和cns***，pirb的mrna和蛋白表达水平***增加。在cns，pirb是髓鞘抑制因子nogo-a、mag、omgp的受体，参与神经元突起芽发和生长锥塌陷，抑制神经元轴突再生和突触可塑性。pirb的细胞外免疫球蛋白结构域(d3-d6)介导了pirb与nogoa的结合。近年来关于阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)研究还发现，pirb是aβ42寡聚体的高亲和力受体，亲和力达到纳摩尔水平。pirb的前两个细胞外免疫球蛋白结构域(d1-d2)介导了aβ42寡聚体和pirb的相互作用，导致丝切蛋白(cofilin)信号通路****组织化学染色结果发现。嘉定区疾病动物模型建模购买

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