崇明区疾病动物模型建模原理

    步骤3、pmsg处理c57bl/6雌性小鼠(6周龄，平均体重20g)，46h后注射hcg，与雄性小鼠合笼交配，次日取受精卵进行显微注射，将步骤1的grna1、grna2、cas9蛋白以及线性化后的打靶载体一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内，产出小鼠，即f0代小鼠。上述步骤中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl，cas9蛋白购自newenglandbiolabs，货号为m0386m。步骤4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr扩增产物测序，鉴定是否为嵌合体。本发明用于f0代小鼠pirb基因pcr鉴定的特异性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1对应的扩增产物大小为，primers2对应的扩增产物为。用于f0代小鼠测序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。通过小鼠疾病模型的构建有助于我们深入揭示潜在致病基因作用机制。崇明区疾病动物模型建模原理

1、动物模型名称：FSH联合HCG致超排怀孕小鼠模型2、实验动物种属：KM小鼠或NIH小鼠3、实验动物性别：雌性4、实验动物年龄：3~4周龄5、实验动物体重：16~18g6、实验动物环境：SPF级 1、实验方法：注射用重组人促卵泡***（FSH）联合注射绒促性素（HCG）诱导。对雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG当天下午约16：00~17：00按雌雄鼠1：1合笼。次日早上检查雌鼠阴栓情况。2、检测标准：合笼后次日雌鼠检查出现阴栓，表明成功构建了超排怀孕小鼠模型。嘉定区提供疾病动物模型建模验性动物模型是指研究者通过使用物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物。

    图2是从侧面展示的压迫元件插入椎间孔的结构示意图。图3是术后大鼠四肢表现情况。图4是术后28天大鼠的双下肢缩足阈值变化曲线图。图5是重复经颅磁刺激对大鼠背根神经压迫模型的影响。具体实施方式以下通过具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。以下的实施例是对本发明的进一步说明，而不是限制本发明的范围。实施例1、模型的制备1、腹腔注射1％戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉大鼠(220-250g)，背部剃毛，碘伏消毒背部皮肤，俯卧位固定于动物手术台上，铺无菌巾。2、于大鼠腰4到骶1水平左侧作一2-3cm纵行切口，切开皮肤，钝性分离椎旁肌至横突上方，暴露腰4椎间孔，腰5椎间孔(椎旁肌可用自制拉钩保持分离状态)。3、将2根***端11为4mm，第二端12为2mm，直径为，第二端12置于腰4椎间孔及腰5椎间孔外。如图1和2所示，可以看到腰4锥体1、腰5锥体2、腰6锥体3、l型棒10、腰4神经根4和腰5神经根5的位置关系。当l型棒10的***端11插入腰4锥体1的腰4椎间孔后，会对腰4神经根4起到压迫作用；同样的，当l型棒10的***端11插入腰5锥体2的腰5椎间孔后，会对腰5神经根5起到压迫作用。从而达到模拟腰椎间盘突出压迫神经根的目的，制备得到大鼠慢性背根神经压迫模型。

    来源：ZSCI基础研究中如果加入动物实验部分则使得研究更加趋于完善，投稿时中稿率也相应会增加。但将动物实验做好却不是一件容易的事情。这篇文章主要讲动物模型的构建技术，把骨科、糖尿病相关的动物模型构建做了一个***的技术汇总，建议先码后读，文章内容有部分做了简化，想看详细讲解可以在文末获取课件！一、骨科相关动物模型1.骨关节炎1）骨关节炎模型构建方法（诱发性）-关节腔内手术法、关节腔注射法。2）模型评分标准①SafraninO染色与OARSI评分（PMID：31046827、30942801）②HE染色与OARSI评分（PMID：30609097）③SafraninO染色与Mankin评分（PMID：30609097）2.骨质疏松症1）骨关节炎模型构建方法去趋法模型PMID：31037128实验动物：小鼠方法：在戊巴比妥麻醉下进行双侧卵巢切除术以诱导骨质疏松症，同时对照组小鼠*进行卵巢外置但未切除。2）模型检测指标(PMID：31037128)①HE染色②Micro-CT③TRAcP染色④Micro-CT相关指标检测3.类风湿性关节炎类风湿性关节炎（RA）是一种慢性自身免疫性疾病状态，其特征是滑膜增生，软骨退化和脊椎关节的骨侵蚀4.强直性脊柱炎1）强直性脊柱炎模型构建方法2）模型检测指标。小鼠是人类疾病理想的动物模型不仅因为小鼠在生理上与人类极为相似而且小鼠的遗传资源非常丰富。

    即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于，步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是：本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法，本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。通过pirb敲入动物模型与不同类型cre小鼠的杂交，可以用于研究ad不同***或不同细胞类型pirb的调节作用。附图说明图1为本发明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位点的打靶质粒载体的构建图；图2为本发明pirb基因敲入的小鼠模型的构建方法的流程图；图3为本发明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr结果鉴定电泳图；图4为本发明f1代pirb敲入的小鼠验证pirb基因敲入效果的测序峰图；图5为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的方法示意图；图6为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的结果图。动物模型的意义和优越性！南通Balbc裸鼠疾病动物模型建模

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    步骤i.将步骤h的吸附柱放入收集管，12000rpm离心2min。步骤j.吸附柱放到一个新的，在吸附柱膜**加入50～200μl灭菌水或者洗脱液，停留5min。(将无菌水或者洗脱液加热到65℃能够增加洗脱的得率)。步骤i.基因组dna定量，洗脱的基因组dna可以通过电泳鉴定。方法2：一种低成本基因组dna的粗提方法：步骤a.每只小鼠剪下一段尾巴(2-5mm)，放入离心管中，加入100μl尾部消化缓冲液，注意不要剪尾太长；步骤b.将离心管及其内容物于56℃孵育过夜；步骤c.过夜后将离心管于98℃孵育13min，使蛋白酶k失活；步骤d.在微型离心机以**大转速旋转15min，上清直接用于pcr体系(每50μlpcr体系加入上清2μl)。尾消化缓冲液成分：50mmkcl10mmtris-hcl()％tritonx-100(b)长链pcr反应：长链引物：pcrprimers1(℃):扩增片段：5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):扩增片段：3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’pirb基因敲除型有上述两条扩增片段，野生型等位基因没有扩增产物。崇明区疾病动物模型建模原理

上海东寰生物科技有限公司位于上海市嘉定区兴贤路1180号5幢2楼206室，是一家专业的经营范围为：从事生物科技领域内的技术开发、技术转让、技术咨询、技术服务。化工产品（除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用物品、易制毒化学品）的销售。【依法须经批准的项目，经相关部门批准后方可开展经营活动】。公司。致力于创造***的产品与服务，以诚信、敬业、进取为宗旨，以建东寰生物产品为目标，努力打造成为同行业中具有影响力的企业。公司不仅*提供专业的经营范围为：从事生物科技领域内的技术开发、技术转让、技术咨询、技术服务。化工产品（除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用物品、易制毒化学品）的销售。【依法须经批准的项目，经相关部门批准后方可开展经营活动】。，同时还建立了完善的售后服务体系，为客户提供良好的产品和服务。诚实、守信是对企业的经营要求，也是我们做人的基本准则。公司致力于打造***的原代细胞，细胞增殖与凋亡，细胞检测试剂盒，动物疾病模型。