北京高精确度数字PCR怎么样
数字PCR采用的策略概括起来非常简单,就是“分而治之”(divide and conquer),这种做法非常类似于计算机科学中的“分治算法”,将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中,在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ,实现“单分子模板PCR扩增”,扩增结束后,通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。在实际的数字PCR实验中,事实上是通过呈现两种信号类型的反应器比例和数目进行统计学分析,计算出原始样本中的模板拷贝数。微反应单元体积越均一稳定、数量相对越多,定量的整体精度就越高。北京高精确度数字PCR怎么样
数字PCR 的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值,因此不受扩增效率的影响,也不必采用看家基因和标准曲线,具有很好的准确度和重现性,可以实现***定量分析。在未来十年内,医学保健的目标是提供质量高效的个性化医疗。PCR 方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR,数字PCR 技术有着无可比拟的优势和***的应用前景。应用领域:突变/稀有变异检测(Mutation/Rare variant detection)拷贝数变异(Copy-number variation)进入外周循环(包括血液和粪便)的**组织核酸分析无创产前筛查转化移植检测药理学(Pharmacogenetics)基因表达分析(Geneexpression analysis)-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析数字PCR可以验证二代测序(NGS)。广东拷贝数变异数字PCR口碑推荐用数字化PCR是非常不错的一个选择,而且也非常便宜。
微小残留病变(minimalresidualdisease,MRD):随着化疗、靶向***、造血干细胞移植等***方式的改进,血液**的***效果日益改善。微小残留病(MRD)导致的复发是目前血液*****的一大难题。动态监测MRD对于评价***疗效、预测疾病复发、实施个体化***具有重要的指导意义。MRD检测方法需满足可定量、标准化、便捷性的要求。目前**常见的是流式细胞学(flowcytometry,FCM)和PCR两大类,但只有灵敏度高于10-4才能被纳入标准化评估。数字PCR技术,其有限稀释的特点可降低复杂的背景干扰,浓缩低丰度目的基因信号,从而提高MRD检测的灵敏度。在慢性髓系白血病中,Wang等同时用dPCR和qPCR检测了61名CML患者的外周血,这些患者在每3个月一次连续3次的qPCR检测中,已经检测不到BCR-ABL,dPCR检测到18%的患者是阳性的。在随后的随访中,dPCR能比qPCR提前几个月检测到BCR-ABL的升高。在淋系白血病的BCL2-IGHMBR检测中,Drandi等在222例样本中验证了dPCR和qPCR方法的一致性,还成功地将dPCR应用于3例qPCR无法检测的病例。数字PCR作为目前灵敏度和准确性比较高的分子检测方法,非常适用于微小残留病变评估。
数字PCR的发展方向包括:(1)提高检测通量,可对多个靶标多个标本并行检测;(2)开发多靶点检测的多重数字PCR检测,可以通过多种荧光染料或标记技术来实现;(3)提高检测自动化程度,实现一键式检测的自动化检测流程;(4)提高检测速度,进一步降低检测时间;(5)提高检测动态范围;(6)降低检测成本。数字PCR仪的技术先进性已经有共识,作为一种全新的思路和手段,临床一直对其抱有很大的期待,是未来临床分子诊断的关键平台。要做到这一点,需要更好的满足临床需求,比如多指标、通量高、自动化、稳定性好、防污染、成本低。好的产品都是在使用中成长起来的,***的产品稳定性带来愉快的使用体验,这还需要时间的历练。同时,我们看到数字PCR作为**科学仪器和医疗器械,国产技术研发、合作的进步非常快,有望更快的推动数字PCR在临床中深入应用。提高检测自动化程度,实现一键式检测的自动化检测流程。
微生物(病毒、细菌等)的检测:疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室可以将基于TaqMan探针法的定量PCR体系无缝地转移到数字PCR上,从而满足该类实验室对于检测结果的要求:灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的***定量结果。其他应用:数字PCR还可以用于转基因成分的检测、移植排斥监控、肠道菌群分析以及药物基因组检测等领域。随着数字PCR荧光通道的增加和多指标检测的成熟,数字PCR将会进入更多应用领域,有力推动生命科学、医学诊断、检验检疫、农业等领域的快速发展。DNA聚合酶对实验的准确性起着至关重要的作用。云南Digital PCR数字PCR经验丰富
制药公司巨头罗氏等也有数字PCR产品在研。北京高精确度数字PCR怎么样
cdPCR主要以Fluidigm公司的BioMark HD系统以及Life Technology公司的QuantStudio 3D系统为**。Bio Mark系统采用微泵阀式芯片,以聚二甲基硅氧烷为芯片材料,主要依靠微流控通道与阀门的开闭进行原始体系分割,在芯片的反应仓进行PCR反应,然后通过类似于基因芯片的方法扫描每个通孔的荧光信号,进行目的序列含量的计算。QuantStudio 3D系统采用阵列微池式芯片,反应液由进样孔直接进入各微反应池。芯片式dPCR生成微滴体积均一,具有较高的稳定性,体系之间影响较小,但技术操作复杂,通量有限且实验成本较高。北京高精确度数字PCR怎么样