江苏准确数字PCR服务

数字PCR通过在一定体积内稀释DNA分子，实现DNA分子计数，从而提供了高精度拷贝数的估算。数字PCR技术在突破PCR扩增效率限制的同时，结果也有很高的重现性。和传统PCR相比，数字PCR技术检测遗传稀有突变时具有更高的灵敏度，在对于低水平痕量DNA分析也有更可靠的结果。数字PCR具有高敏感度、***定量、高特异性、使用标本用量少等特点，可以为临床提供更客观、自动化程度更高的定量检测结果，而且较好的克服了**组织包埋标本DNA质量差、标本量有限等问题，目前已经被应用于多个研究领域，有望成为恶性**的诊断和监测的可靠工具。数字PCR分区方法主要包括3种：微流体数字PCR、微滴数字PCR和芯片数字PCR。江苏准确数字PCR服务

可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。同时，从公式也可以看出，随着反应阳性体系数（X）的增加，体系中目标分子的拷贝数相对于X会有较大的差距，随着X的持续增加，数字PCR结果的不确定度也随着提高，总体来说，数字PCR阳性体系的数量不得超过总体系数量的80%。另一个方面，N的增加会使整个数字PCR体系具有较大的线性范围，并可以提高反应的灵敏度、稳定性以及可重复性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情况下，增加分配的腔室数和液滴数。江苏准确数字PCR服务低丰度DNA模板分子的精确定量。

使用不合适的引物可能会引入引物二聚体、非特异性扩增等，进而影响实验结果的准确性。在此，小Q建议您在设计引物时需做以下几个方面的检查，***需对设计好的引物进行BLAST比对分析，以确保引物的特异性！在数字PCR***定量实验中，对于基因突变检测、基因表达差异分析和拷贝数变异鉴定等对实验精细性要求较高的实验，需要特异性更高的Assay。QIAGEN基于QIAcuity数字PCR平台开发并验证了针对上述常见应用的700多组dPCR LNA Assay，所有Assay均经过锁核酸修饰来增强其对互补序列的亲和力和特异性，进而提高实验结果的准确性。

2013年下半年，Life-technologies推出了QuantStudio 3D数字PCR系统， 这也是目前数字PCR市场上***型号的产品。采用高密度的纳升流控芯片技术，样本均匀分配至20,000个单独的反应孔中。在整个工作流程中，样本之间保持完全隔离 ，可以有效地防止样品交叉污染，减少移液过程，简化操作步骤。同时芯片式设计避免了微滴式系统可能面临的管路堵塞问题。作为Life-technologies在OpenArray芯片平台之外推出的全新的芯片式数字PCR系统，值得一提的是，这个全新的系统在设计理念上综合考虑了系统稳定性与运行成本因素，直接反映了该系统“适合所有分子生物学实验室使用的数字PCR系统”的市场定位。整个实验过程需严格按照标准流程进行实验操作。

该技术提出至今虽然只有十几年时间，但是由于其独特的技术优势和应用前景，使得其产业化发展相当迅速。迄今为止，已有包括Fluidigm和 Bio-Rad等几家公司相继推出了数字 PCR 产品，并已经应用于单细胞分析、**早期诊断和产前诊断等研究领域。目前，有关数字 PCR 技术的综述类文献并不多见，本文将在现有文献基础上，对该技术的原理、定量方法、分类及应用进行评述，并对发展趋势进行展望。数字 PCR 技术提出至今，相关技术和产业化发展都非常迅速。迄今为止，数字 PCR 技术主要有三类: 微反应室/孔板、大规模集成微流控芯片和液滴数字PCR系统。通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。江苏准确数字PCR服务

近年来，Bio-Rad、凯杰、赛默飞等巨头公司纷纷通过收购、投资等方式布局数字PCR业务。江苏准确数字PCR服务

乳腺*的分型：ER，PR和HER2是乳腺***常用的分子标志物，在患者在开始***之前必须要明确这几个分子标志物的具体状态。传统的检测方法是通过IHC来确定蛋白的表达情况，而HER2检测也还可以通过FISH来判断染色体的扩增情况。尽管相应的检测都有明确的指南来加以规范，但是在临床实践过程之中，有些检测结果不可避免的还是会受到人为操作和判读的主观影响，从而导致同一样本的结果偏差，为临床的治疗带来了极大的困惑。有研究者尝试采用四重数字PCR方法，对这几个标志物同时进行定量检测。95例石蜡标本的对比分析结果显示，HER2，ER和PR与IHC的一致性分别为96.8%，91.5%和85.1%，而ROC曲线下面积则分别为0.991，0.977和0.920，说明该方法与IHC方法有较好的一致性。此外，相比于IHC方法，数字PCR方法还具有操作和判读标准化、结果重复性好、检测周期短、标本使用量少等优势，未来在临床将会有很好的应用前景。江苏准确数字PCR服务